Ann Rutherford nació el 2 de noviembre de 1917 (otras fuentes citan el 2 de noviembre de 1920) en Toronto, Canadá. Hija de un cantante de ópera y de una actriz, Ann y su familia se trasladaron a California cuando todavía era una niña. En el soleado estado norteamericano y a mediados de los años 20 comenzó a actuar en programas radiofónicos y en el teatro.
En 1935 inició su carrera cinematográfica, apareciendo en diversos westerns de escaso presupuesto que solía protagonizar un joven John Wayne o el cantante y actor Gene Autry. Entre ellos "Melody Trail" (1935) o "The singing vagabond" (1935), con Autry como partenaire, o "The Lawless Nineties" (1936), "The lonely trail" (1936) o "The Oregon Trail" (1936), con el acompañamiento de Wayne.
En 1937 firmó un contrato con la Metro Goldwyn Mayer y consiguió la fama gracias al papel de novia de Mickey Rooney en la popular serie dedicada al personaje de Andy Harvey, apareciendo en películas como "Las vacaciones del Juez Harvey" (1938), "El juez Harvey y sus hijos" (1938), "Andrés Harvey se enamora" (1938), "Un nuevo amor de Andres Harvey" (1939), "Andres Harvey millonario" (1939) o "Andrés Harvey Tenorio" (1940).
En 1942 se casó con su primer esposo, David May. Su segundo y último marido fue el productor y ocasional actor William Dozier, con quien contrajo matrimonio en 1953.
Además de la serie de películas de Andy Harvey, Ann pudo ser vista generalmente en personajes secundarios en interesantes títulos a lo largo de los años 30 y 40, como "Cuento de Navidad" (1938) de Edwin L Marin, "Of human hearts" (1938) de Clarence Brown, "Lo que el viento se llevó" (1939) de Victor Fleming, "Más fuerte que el orgullo" (1940) de Robert Z. Leonard, "Aventureros de Dakota" (1941) de Alfred E. Green, "Silbando en la oscuridad" (1941) de S. Sylvan Simon, "La vida secreta de Walter Mitty" (1947) de Norman Z. McLeod, o "El burlador de Castilla" (1949) de Vincent Sherman.
A partir de 1943 y tras romper el contrato con la Metro, Ann condujo ella misma su carrera como free-lance.
Los éxitos no llegaron y con el final de la década de los 40 Ann Rutherford optó por abandonar el cine.
En el año 1972 de forma sorprendente regresó a la pantalla grande para participar en la producción de intriga "Solo matan a su dueño", una película dirigida por James Goldstone.
